Использование трансгенных животных в качестве биореакторов для синтеза рекомбинантных белков, секретируемых в молоко, является актуальным направлением биотехнологии. Прогресс генно-инженерных технологий, включая появление технологий направленного редактирования генома, существенно упрощает и повышает эффективность получения трансгенных животных, в том числе хозяйственно ценных видов. В данном обзоре рассмотрены технологии получения трансгенных животных с акцентом на животных-продуцентов рекомбинантных белков, секретируемых в молоко. Сегодняшнее состояние и перспективы развития этой области биотехнологии описаны в свете появления новых технологий редактирования генома, кратко освещены экспериментальные и уже используемые на практике разработки.
Бета-лактоглобулин - основной белок молочной сыворотки почти у всех млекопитающих, кроме грызунов и приматов. Регуляторные районы гена бета-лактоглобулина (BLG) овец, коз и крупного рогатого скота применяют в составе генетических конструкций. Цель данной работы -создание плазмиды, содержащей 5'- и 3'- плечи гомологии к гену бета-лактоглобулина крупного рогатого скота. Фрагмент, содержащий ген биологически активного белка, может быть встроен в полученную плазмиду по сайту для рестриктазы EagI на стыке плечей гомологии. Полученная ДНК-матрица предназначена для сайт-специфичной интеграции гомологичной рекомбинацией в ген бета-лактоглобулина крупного рогатого скота при использовании CRISPR/Сas9 технологии. Для подбора сайтов внесения двухцепочечных разрезов был определен полиморфный вариант гена BLG быка, сперму которого предполагается использовать для оплодотворения яйцеклеток коровы в условиях in vitro. Была разработана стратегия внесения двухцепочечных разрезов в ген BLG и по...