Методы определения группы крови

Методы определения групп крови

Определение групп крови проводят методом прямой гемагглютинации на плоскости в нативной крови (венозной или капиллярной, с консервантом или без).

Методы определения групп крови:

• при помощи изогемагглютинирующих сывороток — в крови устанавливается наличие (отсутствие) агглютиногенов;
• перекрестным способом — одновременно используются изогемагглютинирующие сыворотки и стандартные эритроциты, что позволяет определить наличие (отсутствие) агглютининов конкретных групп.

Для избегания ошибок группу крови определяют в два этапа: в стационаре (в кабинете трансфузиологической помощи, в процедурном кабинете) с использованием изогемагглютинирующих сывороток разных серий каждой группы; в клинико-диагностической лаборатории из доставленной пробирки перекрестным методом (с использованием стандартных эритроцитов и сывороток).

Метод изогемагглютинирующих сывороток

Определение группы крови проводят при хорошем освещении и температуре в помещении +15-25 °С. На пластине, предназначенной для определения группы крови слева надписывают «анти А+В», в середине — «анти-В», справа — «анти-А». На пластину под обозначения наносят по капле стандартных сывороток (по 0,1 мл) соответствующих групп крови. Рядом к каждой капле сыворотки добавляют 0,01 мл исследуемой крови в соотношении 10:1. Сыворотку кровь смешивают индивидуальной чистой палочкой, пластинку покачивают и на 1-2 минуты отставляют в сторону, периодически, в течении 5 минут, покачивания повторяют. Через три минуты в капли, где наступила агглютинация, добавляют по капле изотонического раствора натрия хлорида, после чего продолжают наблюдение до истечении 5 минут.

В каждой капле реакция гемагглютинации может быть или положительной, или отрицательной. При положительной реакции в смеси появляются хорошо различимые красные комочки (агглютинаты) — склеенные эритроциты. Постепенно комочки сливаются в хлопья неправильной формы. Сыворотка практически полностью обесцвечивается. Если реакция отрицательная — смесь равномерно окрашена в красный цвет, не обнаруживаются комочки или хлопья. Результаты с сыворотками 3 групп дают четыре разные комбинации реакций:

• все смеси равномерно окрашены в красный цвет, признаки склеивания эритроцитов отсутствуют (во всех группах отрицательная реакция) — кровь не содержит агглютиногенов А и В, принадлежит к I (0) группе;
• сыворотки групп «анти-А и В», «анти-А» дают положительную реакцию, сыворотка группы «анти-В» дает отрицательную реакцию, в крови есть агглютиноген А, кровь принадлежит ко II (А) группе;
• сыворотки групп «анти-А и В» и «анти-В» дают положительную реакцию, сыворотка группы «анти-А» дает отрицательную реакцию, в крови есть агглютиноген В, кровь принадлежит к III (В) группе;
• сыворотки всех групп дают положительную реакцию, кровь содержит агглютиногены А и В, принадлежит к IV (АВ) группе.

Агглютинины «анти-А» и «анти-В» выявляют в реакции прямой агглютинации стандартных эритроцитов А и В с исследуемой сывороткой. Антигены эритроцитов выявляют в реакции прямой агглютинации с использованием стандартных реагентов, включающих полные «анти-А» и/ или «анти-В» антитела. Реагенты — моноклональные антитела или полученные от иммунных доноров аллоиммунные сыворотки.

Для исключения неспецифической агглютинабельности эритроцитов нужно провести контрольное дополнительное обследование со стандартной сывороткой IV (АВ) группы. На пластинку наносят каплю сыворотки группы IV (АВ) и добавляют к ней небольшую каплю крови. Кровь и сыворотку перемешивают и оставляют при периодическом покачивании на несколько минут. Отсутствие агглютинации в смеси при наличии ее в каплях со стандартными сыворотками групп «анти-А», «анти-В» и «анти-А и В» указывает, что реакция является специфической, поэтому кровь относится к группе IV (АВ).

Перекрестный метод определения группы крови

Перекрестный метод определения группы крови — это одновременное определение групповых агглютиногенов в эритроцитах крови с использованием стандартных сывороток, а также групповых агглютининов в сыворотке крови с использованием стандартных эритроцитов I, II, III групп.

Кровь собирают из вены или пальца в сухую пробирку, после чего подвергают центрифугированию, или на 20-30 минут оставляют в покое для отделения сыворотки. Для исследования используют отмытые эритроциты, цельную кровь, эритроциты в сыворотке, плазме, физиологическом растворе. На верхнюю часть пластинки слева направо наносят обозначения: «анти-А и В», «анти-В» и «анти-А». На верхнем крае указывают фамилию и инициалы обследуемого.

На пластинку под соответствующие обозначения наносят по 0,1 мл стандартных изогемагглютинирующих сывороток. На нижнюю часть пластинки наносят по 0,01 мл стандартных эритроцитов (под соответствующими обозначениями). Из пробирки, содержащей кровь обследуемого осторожно извлекают сыворотку и добавляют по капле (0, 1 мл) на подготовленные стандартные эритроциты. После набирают эритроциты со дна пробирки и наносят по маленькой капле рядом с подготовленной стандартной сывороткой.

Сыворотку перемешивают с эритроцитами, пластинку покачивают и отставляют на 1-2 минут, после чего периодически покачивают. В течение 5 минут наблюдают за реакцией. Через 3 минуты в капли, где наблюдается гемагглютинация, добавляют по 0,05 мл изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение до истечения 5 минут.

Результаты реакций, полученных при помощи стандартных эритроцитов и стандартных сывороток должны совпадать, указывать на содержание агглютининов и агглютиногенов, соответствующих одной группе крови. Возможные комбинации сочетаний:

• со стандартными сыворотками — отрицательная реакция, отсутствие групповых агглютиногенов, кровь I (0) группы; отрицательная реакция сыворотки со стандартными эритроцитами группы I (0), положительная реакция с эритроцитами II (А) и III (В) групп, что указывает на наличие в крови агглютининов α и β;
• со стандартными эритроцитами групп I (0) и II (А) — отрицательная реакция, положительная реакция с эритроцитами группы III (В); наличие в крови агглютинина β;
• со стандартными эритроцитами групп I (0) и III (В) — отрицательная реакция, положительная реакция с эритроцитами группы II (А); наличие в крови агглютинина α;
• со стандартными эритроцитами всех групп — отрицательная реакция, отсутствие в исследуемой крови агглютининов.

Основные ошибки при определении групп крови

Причины ошибок при определении групп крови:

• технические ошибки (загрязненное оборудование, сильное центрифугирование, неверное соотношение сыворотки и клеток, загрязнение реагентов, проведение исследования при высокой температуре, неправильная маркировка эритроцитов и/ или реагентов);
• аномальные свойства эритроцитов (слабые формы антигенов А или В, наличие экстрантител, полиагглютинабильность эритроцитов, образование эритроцитами «монетных столбиков», смешанная агглютинация, эритроциты, сенсибилизированные эритроциты);
• аномальные свойства сыворотки.