Разработка методов анализа лекарственных препаратов, производных птеринов

Птерин и птериновые производные

В структуру молекул лекарственных веществ группы птерина входят фрагменты 6-метилптерина, S-глутаминовой и n-аминобензойной кислот. Соединения являются оптически активными, что используется в контроле качества субстанций.

Значение птериновых производных:

• факторы роста микроорганизмов;
• дополнительные факторы питания животных;
• птериновые витамины (фолиевая кислота, или витамин В), обладают противоанемическим действием;
• фолиевая кислота входит в ферментную систему холинэстеразы, ускоряющей гидролиз ацетилхолина.

Лекарственные препараты, производные птерина: фолиевая кислота; метотрексат; производные изоаллоксазина (рибофлавина мононуклеотид).

Методы анализа фолиевой кислоты

Фолиевая кислота состоит из птерина, связанного с ним (при помощи метиленовой группы) остатка п-аминобензойной кислоты, остатка L- глутаминовой кислоты. Проявляет амфотерный характер, обусловленный наличием нескольких атомов азота и карбоксильных групп. Фолиевая кислота представляет собой кристаллы желто - оранжевого цвета, гигроскопичные, без запаха и вкуса, на свету разлагаются, практически не растворимые в воде и органических растворителях (ацетоне, этаноле, эфире, хлороформе), хорошо растворимые в растворах щелочей и в разбавленных минеральных кислотах. Фолиевая кислота является нестойким веществом, легко распадается под действием щелочей и кислот, окислителей и восстановителей, нагревания и света.

Фолиевая кислота участвует в обратимых окислительно-восстановительных превращениях. При гидрировании в щелочной среде реакция идет по двойной связи 7-8 с образованием дигидровитамина, легко окисляемого кислородом воздуха в исходную кислоту. Быстро и необратимо разрушают фолиевую кислоту ультрафиолетовые лучи.

Высокая лабильность фолиевой кислоты обусловлена наличием атеринового ядра, включающего амино- и гидроксигруппы, которые дают возможность таутомерным превращениям, а также наличием пептидных связей, содержащих остатки глутаминовых кислот. За счет наличия в птериновой части молекулы фолиевой кислоты третичных атомов азота и гидроксильных групп образуются внутрикомплексные соединения с солями свинца, меди (II), кобальта, серебра, железа (III) (окрашенные и не растворимые в воде).

Окраска растворов солей металлов при добавлении к фолиевой кислоте:

• ацетат свинца — лимонно-желтый осадок;
• сульфат меди (II) — зеленый;
• нитрат кобальта — темно-желтый;
• нитрат серебра — желто-оранжевый;
• хлорид железа (III) — красно-желтый.

Количественное определение фолиевой кислоты:

1. Метод фотоэлектроколориметрии (при 550 нм), в основе которого лежит реакция образования азоткрасителя.
2. Флуориметрический метод.
3. Полярографический метод.
4. УФ-спектрофотометрия (при длине волны 365 нм).
5. Обратное алкалиметрическое определение.

Фолиевая кислота является составной частью витаминов группы В, принимает участие в синтезе нуклеиновых кислот и аминокислот. Используется для усиления эритропоэза при отдельных видах анемий, лейкопениях, вызванных лекарственными препаратами и ионизирующей радиацией.

Методы анализа метотрексата

УФ-спектр 0,001% раствора метотрексата должен иметь в растворе гидроксида натрия (0,1 М) максимумы поглощения в области нм: 258 нм, 303 нм, 370 нм. Отношение оптических плотностей при 303 и 370 нм составляет 2,8 к 3,3. Метотрексат окисляется перманганатом калия (хлоратом калия), в УФ-свете дает голубую флуоресценцию.

Количественное определение метотрексата:

1. Хроматоспектрофотометрия.
2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Метотрексат требует осторожного обращения, необходимо избегать его попадания на кожу и слизистые оболочки. Метотрексат является противоопухолевым средством, его используют при лечении острых лейкозов, рака легкого, злокачественных образований молочной железы, матки.

Методы анализа производных изоаллоксазина

Производные изоаллоксазина — это флавиновые витамины, или витамин В2 рибофлавин.

Рибофлавина мононуклеотид кристаллический порошок со слабым специфическим запахом, желто-оранжевого цвета, горький на вкус. Гигроскопичен, на свету неустойчивый. Рибофлавин практически не растворим в воде и органических растворителях (ацетоне, этаноле, бензоле, эфире, хлороформе), хорошо растворим в уксусной и хлороводородной кислотах, растворах едких щелочей.

Нейтральные растворы рибофлавина мононуклеотида имеют интенсивную желто-зеленую окраску при флуоресценции. В щелочных и кислых средах флуоресценция исчезает. Витамин В2 устойчив к нагреванию, кислой среде, чувствителен к щелочной среде. Обладает высокой светочувствительностью в зависимости от интенсивности облучения и окружающей среды.

Рибофлавина мононуклеотид образует в нейтральных растворах с солями некоторых металлов (Fe, Cu, Zn, Ag, Ni, Co, Mn) комплексные хелатные соединения. В кислых водных растворах рибофлавин с нитратом ртути дает оранжевое окрашивание. Для установления в рибофлавина мононуклеотиде допустимого количества светопоглощающих примесей определяют оптическую плотность его растворов при разных длинах волн. Содержание влаги по методу Фишера должно быть не более 1,5%.

Количественное определение рибофлавина мононуклеотида:

1. УФ-спектрофотометрия в среде натрия ацетата и уксусной кислоты (при длине волны 267 нм).
2. Флуориметрическое исследование (при длине волны 530 нм).
3. Спектрофотометрия (при длине волны 445 нм).
4. Метод Малапрада (периодатный метод).

Рибофлавина мононуклеотид широко используется в офтальмологии для лечения катаракты, конъюнктивита, язвы роговицы, кератита. Витамин В2 назначают при гипо - и авитаминозе, при незаживающих язвах и ранах, болезни Боткина, лучевой болезни.