Субклонирование

Характеристика scFv-антител против дифтерийного токсина, выделенных из иммунной и неиммунной библиотек иммуноглобулиновых генов

Дифтерийный токсин играет ведущую роль в развитии дифтерийной инфекции, поэтому антитела против токсина активно используются при диагностике и лечении дифтерии. Нами ранее из наивной и иммунной библиотек иммуноглобулиновых генов мыши был отобран ряд scFvантител против субъединицы В дифтерийного токсина. Целью данной работы было охарактеризовать ряд важных свойств полученных scFv. Рестриктным анализом подтверждено, что scFvантитела, отобранные после одного раунда селекции из иммунной библиотеки, отличаются друг от друга, то есть все отобранные последовательности уникальны. Установлено, что scFvантитела, выделенные из иммунной библиотеки, являются специфичными именно к последовательности фрагмента В дифтерийного токсина. Вестернблотанализ клонов, полученных после субклонирования ДНКпоследовательностей scFv в векторе р ЕТ-22b, показал, что целевой протеин экспрессируется преимущественно в нерастворимой форме. Полученные результаты подтвердили, что был отобран ряд клоновпродуцентов гете...