Типичные проявления лейкозов (гемобластозов) у различных видов с.-х. животных.

Лекция №5: Типичные проявления лейкозов (гемобластозов) у различных видов с.-х. животных Вопросы к рассмотрению: 1. Лейкозы крс 2. Лейкоз овец 3. Лейкоз коз Лейкозы коров Лейкоз КРС весьма широко представлен на территории РФ, да и ближайших государств. Указывая на вирусный характер заболевания и видовую специфичность лейкоза КРС, некоторые авторы предполагают возможную роль возбудителя в лимфолейкозах у человека. Как уже упоминалось, заболевание носит характер вирусной инфекции и распространяется гематогенным, половым, трансплацентарным, контактным, алиментарным, реже — иным путем. Трансплацентарный путь заражения менее значим в эпидемическом отношении. Чаще телята заражаются в результате поглощения молока от пораженных коров. Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) относится к семейству Retroviridae типа С. Выявлена наследственная склонность к развитию лейкоза у КРС и других видов животных, что требует учета этого обстоятельства при выведении новых и поддержании имеющихся пород, необходимости выбраковки по данному признаку. К сожалению, известно, что к лейкозу нередко склонны высокопродуктивные экземпляры коров. Абсолютное большинство поражений связано с тропностью вируса к клеткам лимфоидного ростка кроветворения и протеканием в виде хронического лимфолейкоза с преимущественным поражением В-лимфоцитов, однако при диагностике заболевания важно помнить, что уровень вирусологического заражения (который может достигать 20% от поголовья и более) не сопровождает столь же интенсивный уровень развития лейкоза. В частности, опухолевые проявления процесса выявляются только у 0,1% зараженных животных. Хронический лимфолейкоз — наиболее частая форма поражения ВЛКРС, несколько реже выявляется гистиоцитарная саркома. Примерно в каждом десятом случае можно выявить острый недифференцируемый лейкоз. Примерно с такой же частотой выявляются лимфосаркома и лимфогранулематоз. Хронический моноцитарный лейкоз выявляется не более чем у 5% заболевших животных. Клиническая периодизация лейкоза КРС выделяет несколько периодов. Инкубационный период может охватывать длительный промежуток времени, но в крови пораженных коров он обнаруживается через две недели, что позволяет рассматривать это животное как потенциального переносчика. До появления антител к вирусу у животных проходит от двух недель до полугода. В инкубационном периоде иногда выявляют стадию бессимптомного носительства. В эти сроки у животных выявляются вирусы, и в большинстве случаев (кроме возможных ситуаций иммунологической толерантности) обнаруживают специфические антитела. Большинство животных весьма долго находятся на этой стадии, и признаки заболевания могут не развиться в течение всей жизни. Гематологическая стадия лейкоза соответствует появлению изменений, выявляемых при анализе периферической крови. Выделяют алейкемическую, сублейкемическую и лейкемическую формы. При алейкемической форме общее число лейкоцитов не меняется или изменяется незначительно, но в крови выявляется лимфоцитоз, иногда с появлением молодых лимфоцитов. При развитии процесса в классической форме алейкемические изменения крови обычно обнаруживают в первые 1–3 года от начала болезни. Сублейкемическая форма (стадия) выявляется у половозрелых коров 3–5-летнего возраста и характеризуется лейкоцитозом с нарастающим лимфоцитозом. Лейкемическая форма предполагает повышение клеток более 45–50x109/л. В эти сроки выявляются выраженный лимфоцитоз и молодые формы лимфоидного ростка кроветворения. Продолжительность развития этой формы, обычно следующей за сублейкемической, охватывает 3–3,5 года. Клинические проявления заболевания обычно выявляются при сублейкемической и лейкемической формах и проявляются в увеличении лимфатических узлов, поражении внутренних органов (гепатомегалия и спленомегалия, поражение серозных покровов, сердца, почек, сычуга), снижении иммунных возможностей животного. Патологоанатомически у животных на терминальных стадиях выявляются крупные, спаянные с прилежащими тканями лимфатические узлы, нередко с участками коагуляционного некроза (особенно в корковой зоне). Нередко видны участки размягчения со сливкоподобным содержимым. Зоны поражения внутренних органов в завершающей стадии процесса весьма многочисленны и разнообразны. Общим является саловидный вид разрастаний, на гистологическом уровне содержащих лимфоидные клетки, полиморфные по строению ядер. По сравнению с лимфоцитами они крупнее, базофильная цитоплазма нередко вакуолизирована. Нередко видны проявления кариолизиса и кариопикноза этих клеток. Наиболее часто поражаются лимфатические узлы тазового пояса, предлопаточных и надколенных складок. Нередко обнаруживается экзофтальм, кожные поражения. Течение заболевания, протекающего по типу лимфосарком, сопровождается преимущественным поражением внутренних органов, изменением структуры (малигнизацией) пораженных органов и соответствующими симптомами. При анализе клинического распределения пораженных ВЛКРС животных обнаруживается, что лишь незначительный процент инфицированных коров проявляют развернутые признаки заболевания, соответствующие опухолевой форме процесса. Такие проявления выявляются в возрасте 4–8 и более лет. Персистирующий лимфоцитоз является более частым нарушением и протекает в виде доброкачественного лимфопролиферативного нарушения. Заболевание обычно встречается не более чем у трети инфицированных животных и редко переходит в опухолевую форму. Проявляется в виде стабильного абсолютного лимфоцитоза. Скрытая форма заболевания наиболее частая и обеспечивает резервуар инфекции, так как такие животные являются вирусоносителями без каких-либо внешних проявлений заболевания. Гематологический анализ при лимфоидной форме поражения сопровождается нарастающим лимфоцитозом. Хроническое течение сопровождается преимущественным содержанием зрелых клеток. Острое течение или обострение хронического может вести к накоплению бластных клеток (лимфобластом и пролимфоцитов). Персистентная форма лимфоцитоза характеризуется увеличением числа В-лимфоцитов. Гематологические изменения в крови больных животных послужили основой для предложения диагностики лейкоза по изменению этих показателей. Во внимание берутся два основных показателя (количество лейкоцитов в целом и содержание лимфоцитов). Исследование этого показателя рассматривается как лейкозный ключ. Разработано несколько вариантов таких ключей. Один из них предложен Г. А. Симонян (1988). В соответствии с этим ключом у коров от 2 до 4 лет число лейкоцитов менее 11×109/л исключает заболевание лейкозом. Если содержание лимфоцитов при выявленном лейкоцитозе достигает 8–10×109/л, то такие животные подозрительны в отношении заболевания. Содержание лимфоцитов более 10×109/л указывает на заболевание лейкозом. У коров от 4 до 6 лет число лейкоцитов более 10×109/л предполагает необходимость исследования лейкограммы на предмет лейкоза. Содержание лимфоцитов от 6,6 до 9×109/л подозрительно, а более 9×109/л указывает на заболевание лейкозом. Аналогичные показатели у коров старше 6 лет соответственно составляют менее 9×109/л лейкоцитов, от 5,5 до 8×109/л лимфоцитов и более 8×109/л лимфоцитов. При выявлении подозрительных и предполагаемых больными животных их повторно обследуют через 2–3 месяца. При трехкратных положительных или подозрительных результатах предполагают заболевание лейкозом. Исследование гематологическим методом не позволяет выявить алейкемические и лейкопенические варианты заболевания. Еще один из вариантов лейкозного ключа приводится в методических указаниях по диагностике лейкоза КРС, утвержденных Главным управлением ветеринарии РФ от 23 августа 2000 г. № 13-7-2/2130 (табл.). Если количество лейкоцитов в пробе крови у животного с учетом возраста будет меньше числа, указанного во второй графе таблицы, то предполагается, что у животного отсутствуют признаки заболевания лейкозом, и результат исследования считают отрицательным. Как видно из описания и таблицы, он аналогичен «лейкозному ключу», предложенному Г. А. Симонян (1988), отличаясь введением параметра процентного содержания лимфоцитов в норме у КРС. Анализ лейкоцитов в мазке крови выявляет наряду с типичными средними (преобладают), малыми и большими популяциями лимфоцитов (популяции лимфоцитов имеют диаметр 5–9 мкм) другие клетки. Ридеровские формы лимфоцитов имеют неправильной формы ядра с бухтообразным вдавлением. Можно выявить двуядерные формы лимфоцитов. Лимфоподобные клетки имеют вытянутую иногда веретенообразную форму, бахромчатые края, более нежную структуру ядерного хроматина. Лимфобласты отличаются более крупными размерами (11–13 мкм), ободок цитоплазмы широкий, голубой или слабо фиолетово-синий, ядро светлое, с заметным хроматином, видны ядрышки. При хроническом течении лимфобласты нередко имеют значительные размеры. Пролимфоциты обнаруживаются уже при начальных проявлениях лейкоза и имеют диаметр 9–11 мкм, относительно хорошо развитую голубого цвета цитоплазму, более светлое ядро, нередко с ядрышком. Бластные клетки (микрогемобласты), имея аналогичный диаметр с пролимфоцитами и лимфобластами, отличаются нежной сетевидной структурой хроматина. Встречаются также полиморфоклеточные, резко измененные популяции, которые трудно внести в какую-либо группу в силу выраженной клеточной дисплазии. Таблица Количество лейкоцитов и лимфоцитов в литре крови для выявления лейкоза КРС. «Лейкозный ключ» Возраст животного Здоровые животные Подозрительные по заболеванию животные Больные лейкозом животные лейкоцитов ×109/л процент лимфоцитов лимфоцитов ×109/л лимфоцитов ×109/л 1-2 года до 12 до 75 9-11 свыше 11 2-4 года до 11 до 70 8-10 свыше 10 4-6 лет до 10 до 65 6,5-9,0 свыше 9 Старше 6 лет до 9 до 60 5,5-8,0 свыше 8 *Примечание. Данные таблицы приводятся согласно методическим указаниям по диагностике лейкоза КРС, утвержденным Главным управлением ветеринарии РФ от 23 августа 2000 г. № 13-7-2/2130. Моноцитарный лейкоз сопровождается лейкоцитозом (обычно невыраженным) с повышенным содержанием моноцитоподобных клеток. Цитоплазма окрашена несколько ярче моноцитов, азурофильная зернистость может и отсутствовать. Ядра грубоватые по форме, формируют лапчатые структуры, иногда заметен ядрышковый аппарат. Еще реже хронической моноцитарной встречается острая монобластическая форма с появлением монобластов и полиморфных по организации клеток, с быстрым, прогрессирующим течением. При биохимическом исследовании плазмы крови у лейкозных животных выявлена гиперглобулинемия и гипоальбуминемия (с 4 до 2–1,5%). Иногда выявляется гиперальфаглобулинемия. У телят выявляется повышенный уровень IgM, реактивных к антигенам ВЛКРС. У взрослых животных вслед за повышением IgМ в последующем возрастает класс специфичных к ВЛКРС IgG. Диагностическая ценность исследования ККМ не столь значительна и изменяется параллельно динамике клинических и гематологических показателей в виде лимфоидной гиперплазии и метаплазии ККМ и ЖКМ. В настоящее время широко применяются серологические методы диагностики. К ним относят реакции иммунофлуоресценции (РИФ), иммунодиффузии (РИД), длительного связывания комплемента в микрообъемах (РДСКМ), радиоиммунопреципитации (РИП), метод иммуноферментного анализа (ИФА). Несмотря на высокую специфичность указанных методов (положительный результат обычно является признаком зараженности и формирования антител у животного), они тем не менее не гарантируют абсолютную достоверность диагноза. Они могут быть отрицательными при условии формирования у животного иммунной толерантности (например, при внутриутробном заражении) и ложноположительными. Важно и то, что до 6-месячного возраста у телят слабо формируются иммунные ответы на внедрение вируса, что затрудняет у них раннюю диагностику заболевания. Ложноотрицательные результаты могут возникать у стельных коров во время отела, и их восстановление до положительного уровня происходит примерно через месяц. У инфицированных животных положительные серологические реакции могут возникнуть через 35–49 дней, что требует повторных исследований для более точного исключения зараженных животных в стаде. Не менее специфичен метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий концентрировать малые определенные фрагменты нуклеиновой кислоты в биологическом материале (пробе). При ПЦР-диагностике выявляются участки генома ВЛКРС, специфичные для данного вируса. Метод более точен, так как позволяет выявить вирусоносительство даже при наличии в биопробе очень малых концентраций возбудителя, вне зависимости от иммунного ответа животного на этот вирус. Однако, согласно инструкциям, на сегодня основным методом диагностики, несмотря на соответствующие оговорки, является реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД). После проведения РИД и выявления животных, инфицированных ВЛКРС, больных животных определяют с помощью гематологического метода. Серологическому исследованию подвергают КРС старше 6 месяцев. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 сут после вакцинации, у стельных животных — за 30 сут до отела или через 30 сут после него. Сыворотку для исследования получают в количестве 2–3 мл. Исследование проводят в соответствии с методическими указаниями по диагностике лейкоза КРС, утвержденной Главным управлением ветеринарии РФ от 23 августа 2000 г. № 13-7-2/2130. Согласно этим наставлениям исследуют РИД- или ИФА-методом. РИД-методом исследуют сыворотку крови. Материалом для исследования методом ИФА может служить сыворотка крови, секрет вымени сухостойных коров, молозиво и молоко, используя непрямой или конкурентный ИФА. Выявление инфицированных животных методом биопробы основано на восприимчивости животных гетерологичных видов к ВЛКРС. При введении овцам или кроликам лейкоцитов крупного рогатого скота, инфицированного вирусом лейкоза, у них развивается инфекция, которая сопровождается появлением в крови специфических преципитирующих антител, выявляемых с помощью реакции иммунодиффузии через 14–30 дней после заражения. Для исследования берут овец старше 6 месяцев или кроликов любого возраста. После проведения биопробы исследуют признаки заражения лейкозом. Для выявления вируса лейкоза крупного рогатого скота с помощью ПЦР-метода используется геномная ДНК, выделенная из крови животных. В результате ПЦР вирусоспецифический фрагмент ДНК амплифицируется (умножается) до количества, достаточного для его зрительного определения. ПЦР представляет собой серию циклов, в которых происходит ферментативный синтез специфического участка ДНК. В результате реакции за один цикл количество специфического фрагмента ДНК увеличивается вдвое и, наращивая число циклов, можно резко увеличить содержание вещества. Для проведения ПЦР-анализа достаточно 50 мкл крови, и результат может быть получен в течение рабочего дня. При электронной микроскопии лимфоцитов у животных, пораженных лейкозом КРС, нередко находили аномальные структуры в ядрах лимфоцитов — ядерные карманы в виде инвагинаций кариолеммы. Вирионы вируса лейкоза при этом методе исследования практически не выявляются. Лейкозы овец Выявлено, что ВЛКРС может перекрестно поражать овец. Тем не менее поражения овец встречаются менее часто по сравнению с КРС, и заболевание в основном носит спорадический характер. Выделенный вирус лейкоза овец по своим характеристикам также сходен с ВЛКРС, что указывает на родство этих штаммов. Чаще всего выявляется лимфоидная форма, которая сопровождается клиническими проявлениями в возрасте 3–7 лет. Можно встретить ретикулосаркомы, лимфосаркомы, лимфогранулематоз. Очень редко выявляется миелолейкоз. Течение процесса хроническое, преимущественно сублейкемическое или алейкемическое. Сопровождается анемией и эритропенией. В крови часто выявляются клетки Боткина — Гумпрехта, большие лимфоциты, особенно на терминальных стадиях болезни. Однако использование «лейкозного ключа» при диагностике заболевания сопровождается определенными трудностями. Это связано со значительными колебаниями содержания лейкоцитов в периферической крови у овец и с тем, что у них преобладают алейкемические формы заболевания. С определенными оговорками можно указать, что при наличии лимфоцитов более 13×109/л у овец младше 1 года можно предполагать наличие лейкоза. В возрасте 2–4 лет этот показатель снижается до 9×109/л, а свыше 5 лет — до 8×109/л. Но более низкие уровни показателей лимфоцитов тем не менее не могут гарантировать отсутствие заболевания у животных. Пункция ККМ не всегда информативна, так как поражение последнего происходит далеко не во всех случаях. На фоне нарастающего истощения выявляются лимфоаденопатии. Увеличенные лимфатические узлы могут достигать весьма крупных размеров. Чаще всего поражаются лимфатические узлы брюшной полости. Отеки подкожной клетчатки, периферические парезы, обусловленные сдавливанием нервов и их инфильтрацией опухолевыми клетками. Нередко увеличение селезенки и печени, вселение лейкозных клеток в органы ЖКТ, особенно в сычуг. Примерно у трети животных наблюдается инфильтративное или очаговое поражение почечной паренхимы. Диагноз лейкоза овцам устанавливают по совокупности клинических и гематологических показателей. Подтверждением диагноза могут служить патоморфологические изменения органов. Лейкоз коз Течение и проявления лейкоза весьма близки к аналогичному заболеванию у коров. В периферической крови обнаруживается анемия и абсолютный лимфоцитоз. Заболевание нередко сопровождается поражением поверхностных лимфатических узлов.