Аминотрансферазы (трансаминазы) катализируют межмолекулярный перенос аминогруппы с аминокислот на кетокислоты, причем коферментом в этой реакции служит пиридоксальфосфат, который выполняет роль промежуточного акцептора аминогруппы. Например, аланинаминотрансфераза (АлАТ) катализирует реакцию переаминирования между аланином и α-кетоглутаровой кислотой. Определены кинетические параметры аланинаминотрансферазы картофеля методом Лайнуивера-Берка: Km = 0,298 ммоль/л, V max = 0,0151 мкмоль/мин. При больших концентрациях субстрата было обнаружено снижение скорости ферментативной реакции. Поскольку степень конверсии субстрата в продукт в условиях опыта не превышает 1 %, это говорит о явлении субстратного ингибирования. Используя предположение об образовании неактивного двухсубстратного комплекса, проанализирована соответствующая кинетическая схема для бесконкурентного ингибирования, где роль ингибитора играет субстрат. Выведено уравнение Михаэлиса-Ментен и Лайнуивера-Берка для этого случая ...
Окисление цефалоспорина С (CPC) оксидазой D-аминокислот является первой стадией промышленного процесса биокаталитического производства 7-аминоцефалоспорановой кислоты - исходного синтона получения полусинтетических цефалоспориновых антибиотиков. Нами проведено определение кинетических параметров (каталитической константы и константы Михаэлиса) на основании зависимости начальной скорости реакции от концентрации СРС (метод начальных скоростей) для рекомбинантной оксидазы дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) дикого типа и ее трех мутантных форм с точечными заменами остатка Met на остаток Leu в положениях 104, 156 и 209, а также четверного мутанта TvDAAO RDAF. Показано, что у точечных мутантов введенные замены в первую очередь приводят к уменьшению константы Михаэлиса. Наибольшее увеличение каталитической эффективности kкат/KM (39%) наблюдалось для мутанта с заменой Met156Leu. В случае четверного мутанта константа Михаэлиса у фермента с СРС возросла в четыре раза по сравнению с ферме...